分光光度法 50 管/48 样正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生 H2O2， 是生物体中产生活性氧的代谢途径。 测定原理GOD 催化产生H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2 分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。 试验中所需的仪器和设备可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水 试剂的组成和配制提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 40 mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 8 mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三：液体 2 mL×1 支，4℃保存； 样品测定的准备 组织处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。血清（浆）：直接检测。 测定步骤1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。 2、 GOD 检测工作液的配制：用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混匀，待用； 用不完的试剂 4℃可保存一周； 3、测定将GOD 检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。 4、在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 样本和 960μL 工作液，立即混匀并计时，记录 500nm 下 20s 吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2。计算 ΔA＝A2-A1。 GOD 活力单位的计算1、血清（浆）GOD 活力的计算 单位定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=3333×ΔA 2、动物组织GOD 活力的计算 （1） 按蛋白浓度计算 单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr （2） 按样本鲜重计算 单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。GOD（nmol/min/ g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T=3333×ΔA÷W V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×103 L / mol /cm； d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.04 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL； T：反应时间，1 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
