主要用途
冰冻切片组织TUNEL测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法，包括固着、封阻、通透等完整步骤，从存档中的冰冻组织切片中探寻DNA断点，即运用修饰过的核苷酸，在末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）的帮助下，对DNA单链或双链上断点处的3’末端进行标记，原位探测和定量分析单细胞水平的DNA降解状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于冰冻组织切片的DNA降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。
产品内容 清理液（Reagent A） 120毫升 固着液（Reagent B） 1毫升 封阻液（Reagent C） 500微升 酶标液（Reagent D） 500微升 染色液（Reagent E） 500微升 显色液A（Reagent F） 500微升 显色液B（Reagent G） 5毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存封阻液（Reagent C）、酶标液（Reagent D）、染色液（Reagent E）和显色液A（Reagent F）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent E）和显色液A（Reagent F），避免光照；有效期6月 用户自备 小型染色缸：用于切片的清洗操作 光学显微镜：用于细胞染色后观察分析 甲基绿复染试剂盒（GMS40010）：用于细胞染色后的复染
实验步骤 一、样品预处理 1． 取出10片待测的冰冻组织切片 2． 室温下，小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满样品表面 3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 4． 小心加上100微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面 5． 室温下孵育30分钟 6． 小心移去切片上的固着液（Reagent B） 7． 室温下，将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中，孵育2分钟 8． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 9． 小心加上50微升封阻液（Reagent C），铺满整个样品表面 10． 室温下孵育30分钟 11． 室温下，将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中，孵育5分钟 12． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 二、断点标记处理 1． 小心加上50微升酶标液（Reagent D），铺满整个切片样品表面 2． 在37℃湿润的培养箱里，孵育1小时，保持湿润，避免干燥 3． 小心移去切片上的酶标液（Reagent D） 4． 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 5． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 三、样本染色处理 在染色，将－20℃冰箱里的试剂盒中显色液A（Reagent F）置入冰槽里融化，然后移取200微升显色液A（Reagent F）和1.8毫升显色液B（Reagent G）到2毫升离心管，充分混匀，标记为显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作： 1． 小心加上50微升染色液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面 2． 室温下孵育30分钟，避免光照 3． 小心移去切片上的染色液（Reagent E） 4． 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 5． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 6． 小心加上100微升含有显色液A（Reagent F）和显色液B（Reagent G）的显色工作液，铺满整个切片样品表面 7． 室温下孵育10至30分钟，或直至样本出现棕褐色 8． 小心移去切片上含有显色液A（Reagent F）和显色液B（Reagent G）的显色工作液 9． 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中浸泡5 10． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 11． （选择步骤）进行甲基绿复染（注意：建议使用甲基绿复染试剂盒－GMS40010） 12． 放上盖玻片或封片 13． 即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色 注意事项 1． 本产品为10次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 封阻液（Reagent C）达到100％封闭效果，超过双氧水封闭效果 4． 本产品为生物素标记，超过荧光素标记强度1000倍 5． 本产品无需POD转换，直接在光学显微镜下观察，既方便，又确保信号不受影响 6． 酶标液（Reagent D）严禁反复冻融 7． 清理液（Reagent A）50毫升置于小型染色缸里，可重复使用 8． 所有操作在室温下进行，除操作中规定之外 9． 每次更换试剂溶液时，保持样品表面基本晾干：可以使用餐巾绵纸吸干或枪头抽掉 10． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面 11． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 12． 本公司提供系列细胞凋亡试剂产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定显色清晰
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