主要用途
植物细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在组织细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测组织细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种其适用于新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，滞留持久，荧光清晰。
保存方式 保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；固着液（Reagent B）和离析液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；有效期 6月 用户自备 胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离 细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基 15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器 1.5毫升离心管：用于染色液配制的容器
2毫升离心管：用于样品操作的容器
载玻片：用于组织染色操作 解剖针：用于植物组织解剖 血细胞计数仪：用于细胞计数 （微型）台式离心机：用于样品处理 培养箱：用于染色孵育 比色皿或黑色96孔板：用于荧光定量分析的容器 （共聚焦）荧光显微镜：用于荧光分析 细胞流式仪：用于细胞染色分析 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析 实验步骤 方法一：活体组织染色 1、 加上xx微升清理液（Reagent A）在载玻片上 2、 切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的清理液（Reagent A）中 3、 用解剖针小心压碎根尖 4、 小心移去清理液（Reagent A） 5、 小心加上xx毫升清理液（Reagent A）在根尖上 6、 再加上xx微升染色液（Reagent D） 7、 放进37℃培养箱里孵育20分钟 8、 取出载玻片，移去染色液 9、 小心加上xx毫升清理液（Reagent A） 10、 小心移去清理液（Reagent A） 11、 盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压 12、 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长490nm，散发波长530nm——绿色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高 方法二：组织固定染色 1． 加上xx微升清理液（Reagent A）在载玻片上 2． 切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的清理液（Reagent A）中 3． 用解剖针小心压碎根尖 4． 小心移去清理液（Reagent A） 5． 小心加上xx毫升固着液（Reagent B） 6． 室温下，孵育3小时，避免干化 7． 小心移去固着液（Reagent B） 8． 小心加上xx毫升清理液（Reagent A） 9． 小心移去清理液（Reagent A） 10． 小心加上xx毫升离析液（Reagent C） 11． 室温下孵育5分钟 12． 小心移去离析液（Reagent C） 13． 小心加上xx毫升清理液（Reagent A） 14． 小心移去清理液（Reagent A）
1、 放进37℃培养箱里孵育20分钟 2、 取出载玻片，移去染色液 3、 小心加上xx毫升清理液（Reagent A） 4、 小心移去清理液（Reagent A） 5、 盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压 6、 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长490nm，散发波长530nm——绿色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高
方法五、组织匀浆定量检测 1． 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定100毫克组织重量 2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管 3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次 4． 即刻用刀片切碎组织 5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管 6． 加入预冷的xx毫升清理液（Reagent A） 7． 涡旋震荡5，充分混匀 8． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下） 9． 将所有组织匀浆物移入2毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415） 10． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的2毫升离心管 11． （选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415） 12． （选择步骤）即刻移入到2毫升离心管 13． 移取5微升组织匀浆物进行蛋白定量检测：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒（GMS30030.1） 14． 移取50微升组织匀浆物（样品：100微克蛋白）或xx微升清理液（Reagent A）（背景对照）到1毫升比色杯里 15． 加入xx微升清理液（Reagent A） 16． 再加上xx微升染色液（Reagent D） 17． 上下倾倒混匀 18． 放进37℃恒温水槽孵育20分钟，避免光照 19． 即刻放进荧光分光光度仪检测：激发波长490nm，散发波长520nm——（样品RFU-背景对照RFU）＝实际RFU：增加，表明活性氧族（ROS）含量高 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
