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    土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒说明书

    阅读次数:1496  发布时间:2023/7/4 15:25:09

    注意:正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

     

    规格: 50T/24S

    产品内容:

    试剂一:甲苯 10mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

    试剂二:粉剂×1 瓶,临用加入 20mL 蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存; 试剂三:液体 65mL×1 瓶,4℃保存;

    试剂四 A 液:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;

     

    可见分光光度法


    试剂四 B 液:液体 8mL×1 瓶,4℃保存;临用将 A液倒入 B 液中混合,待用;未用完的液体

    4℃保存一周。

    试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;

    标准品:液体 1mL×1 支, 1mg/mL 氮标准液

    产品说明:

    S-UE 能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

    本法以尿素为基质,利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N,生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比。

    试验中所需的仪器和试剂:

    可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

    操作步骤:

    1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 630nm,蒸馏水调零

    2、培养

    试剂名称

    测定管

    对照管

    风干土样(g

    0.25

    0.25

    试剂一(μL

    125

    125

    振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min

    试剂二(μL

    625

     

    蒸馏水(μL

     

    625

    试剂三(μL

    1250

    1250


    混匀,放入 37℃水浴培养 24h 后,10000g 常温离心 10min,取上清液。

    2、将培养结束的上清液稀释 10 倍( 0.1mL 上清液,加入 0.9mL 蒸馏水若吸光值仍大于 1.5 继续稀释。

    3、标准品的准备:吸取适量的标准溶液,稀释至 10864210.50μg/ml

    4、测氨量

    测定管

    对照管

    标准管

    稀释后的上清液或标准液

    400

    400

    400

    试剂四(μL

    80

    80

    80

    试剂五(μL

    60

    60

    60

    充分混匀,室温放置 20min

    蒸馏水(μL

    460

    460

    460


       混匀,630nm 处蒸馏水调零,测 A 值,ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

    标准曲线的建立:根据标准管的浓度(y)和吸光度(x,减去浓度为 0 的空白管),做标准曲线。

    脲酶活力的计算:

    根据标准曲线,将ΔAx)带入公式计算测定中样品的浓度(μg/mLy 值。单位的定义:每天每 g 土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

    脲酶活力(U/g 土样)=y×10×V 反总÷W÷T=80×y

    10:稀释倍数;T:反应时间,1dV 反总:反应体系总体积:2mLW:样本质量,0.25g

     

    原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司


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