| 产品简介： 氨基酸(Amino acid，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化能反应肝、肾的生理状态，植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。另外，氨基酸还能反映灼伤、伤寒等方面情况。 氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮微板法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)，其吸收峰在波长570nm处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比，该试剂盒主要用于检测植物组织、血清、尿液、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。该试剂盒仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料： 1、无氨蒸馏水或去离子水、60%乙醇 2、水浴锅或恒温箱、研钵或匀浆器、磁力搅拌器或超声波 3、离心机、离心管或试管、96 孔板、酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、配制 AA Lysis buffer (1×)：取1份AA Lysis buffer (5×)加4份去离子水混匀即成。
2、准备样品： ①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取 0.4g，按植物组织： AA Lysis buffer(1×)=0.4g：2.0ml 的比例加入 AA Lysis buffer 匀浆或研磨，用无氨蒸馏水稀释至40ml，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。 ③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer(1×)进行匀浆，1000g离心5min，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存，用于氨基酸检测。 ④高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer(1×)进行恰当的稀释。 3、配制茚三酮显色液:将30mg茚三酮加入到5ml茚三酮稀释液中，搅拌或超声处理至充分溶解，即为茚三酮显色液。4℃避光保存，10天有效。注意：茚三酮显色液10天用不完，应丢弃，重新配制。 4、配制茚三酮工作液:取适量的茚三酮显色液、AA Assay buffer，按茚三酮显色液：AA Assay buffer=35：3的比例混合，即为茚三酮工作液，4℃避光密闭保存，临用现配。 注意：AA Assay buffer所含物质浓度较高，且有刺激性，如有结晶或沉淀，应于40~70℃密闭温育，使其充分溶解后使用。 5、配制维生素C工作液:取出1支维生素C，准确溶解于10ml无氨蒸馏水，混匀，4℃预冷备用；一次性用不完，可分装小管后-20℃保存1周有效。该试剂盒提供的维生素C及其配制的工作液为过量。 6、配制系列氨基酸标准溶液：取出氨基酸标准(50ug/ml)恢复至室温，用无氨蒸馏水将其稀释至10ug/ml，然后按下表继续稀释：
6、AA 测定：加 60%乙醇 210μl，混匀。转入 96 孔板中，空白调零，酶标仪测定标准管、测定管570nm处吸光度(记为A标准、A测定)。 计算：以系列氨基酸标准(1~5 号管) 的氨基酸浓度(μg/ml)为横坐标，以对应吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度计算其氨基酸浓度。根据如下公式计算具体样品中氨基酸的含量： 植物组织样品 AA(μg/g)=C×VT/W 血清、尿液等样品 AA(μg/ml)=C×N 式中：C=测定管的氨基酸浓度(μg/ml) VT=样品稀释的总体积(ml)=40(ml) W=样品鲜重(g) N=稀释倍数 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
