| 注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 方法：可见分光光度法 规格: 50T/48S 产品内容：提取液：60%乙醇，自备，常温保存。 试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。 试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。 标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。10mg/mL 单宁酸标准溶液。 产品说明：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。 在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在 470nm 处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在 470nm 处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。 自备实验用品及仪器：天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。 操作步骤：一、类黄酮提取 将样本烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛之后，称取约 0.1g，加入 1mL 提取液，用超声提取法进行提取，超声功率 300W，破碎 5s，间歇 8s，60℃，提取 30min。12000rpm，25℃，离心 10min， 取上清，用提取液定容至 1mL，待测。 二、标准溶液准备将 10mg/mL 单宁酸标准溶液进行二倍稀释至 1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078、0.039、0.02、0.01、0.005mg/mL 备用。 三、测定操作表1、可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 470nm，蒸馏水调零。 2、操作表 | | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | | 样本待测液（mL） | 0.2 | 0.2 | | | | 标准溶液（mL） | | | 0.2 | | | 蒸馏水（mL） | | | | 0.2 | | 试剂一（mL） | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | | 混匀，室温静置 5min | | 试剂二（mL） | | 0.05 | 0.05 | 0.05 | | 混匀，室温静置 5min | | 试剂三（mL） | 0.4 | 0.4 | 0.4 | 0.4 | | 60%乙醇（mL） | 0.35 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | | 混匀，37℃水浴 45 min，10000g，10min 离心取上清，对照管调零，1mL 玻璃比色皿测定 A470，计算ΔA =A 测定-A 对照，ΔAˊ=A 标准-A 空白。 |
四、类黄酮含量计算1、标准曲线绘制 以单宁酸浓度为横坐标，ΔAˊ为纵坐标绘制标准曲线 y=kx+b，将ΔA 带入方程求得 x； 2、按样本鲜重计算 类黄酮含量（mg/g 鲜重）= x×V 提取÷W=x÷W 3、按样本蛋白浓度计算 类黄酮含量（mg/mg prot）= x×V 提取÷(Cpr×V 提取) = x÷Cpr V 提取：加入提取液体积；1mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。 注意事项：1、 OD 值大于 0.5，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。 2、显色完成后立即测定，2 小时后吸光值会下降 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
