主要用途
植物组织DNA损伤彗星（Comet）荧光检测试剂是一种旨在采用分离的细胞核碱性凝胶电泳，在电场环境下，损伤变性的DNA片段迁移形成特定的形态，即DNA移动尾巴，来进行体外评价和半定量分析DNA损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜植物组织包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）和根尖（root tip）等DNA损伤研究，包括DNA链断裂、氧化性碱基损伤、DNA剪切损伤、DNA交联、DNA修复等，应用于环境和药物毒理学原位监测、原位突变（mutagenesis in situ）分析、氧化应急反应等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简便，重复一致。 技术背景 彗星检测技术（Comet assay），又称为单细胞凝胶电泳检测技术（single cell gel electrophoresis assay；SCGE）或微凝胶电泳检测技术（microgel electrophoresis assay），是基于变性切离的DNA片段，在电场的影响下，从细胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在细胞核内。通过凝胶电泳，呈现出分子迁移图形，形成彗星拖尾（comet tail）现象，即完整DNA的细胞染色体为“头”，而松散和断裂的DNA为“尾”，以此评价DNA损伤程度。这是分析单一细胞DNA链断裂的敏感方法。其技术方法的基本步骤是：一，细胞固定包埋在凝胶里；第二，细胞裂解处理；第三，DNA变性处理；第四，电泳迁移；第五，染色和图像分析。由此观察DNA迁移形态，进行体外检测，成为细胞DNA损伤研究的基本手段。 保存方式 保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent G）避免光照；有效证6月 用户自备 无离子水：用于稀释电泳缓冲液 电泳液（Reagent E）：用于电泳的缓冲液（配方见注意事项8） 中和液（Reagent F）：用于电泳后凝胶清洗（配方见注意事项9） 磨砂载玻片和盖玻片：用于放置样品进行微凝胶电泳的器材 恒温培养箱：用于孵育反应电泳槽：用于微凝胶电泳的装置 1.5毫升离心管：用于混匀基质液的容器 90 mm培养皿：用于样品处理、染色等的容器 荧光显微镜：用于观察细胞核彗星现象 实验步骤 一、 琼脂载玻片准备 1． 准备1张全磨砂载玻片，磨砂面朝上 2． 将胶体液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出） 3． 放进45℃恒温水槽孵育5分钟 4． 移出xx微升胶体液（Reagent A）到载玻片中间 5． 盖上洁净的盖玻片 6． 轻压盖玻片5分钟，确保胶体液铺展 7． 放进4℃冰箱里备用 二、 样品准备 实验开始，将基质液（Reagent C）置于微波炉里加热溶化，然后放进45℃恒温水槽备用。然后进行下列操作。 1． 准备1片新鲜的待测叶片 2． 铺平放进60mm细胞培养皿，置于冰槽里（注意：避免直线光照） 3． 加入xx微升预冷的缓冲液（Reagent B） 4． 使用新的洁净的手术刀，轻柔地切割叶片成细丝状或根尖成细块状（注意：避免切成浆液状或粉碎状） 5． 倾斜和平放培养板三次，确保叶片和缓冲液充分混合 6． 移出50微升细胞核分离液（无渣叶片液）到1.5毫升离心管 7． 加入xx微升在45℃恒温水槽里的基质液（Reagent C） 8． 用枪头上下抽吸混匀 9． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片 10． 即刻移取75微升胞核基质混合液到载玻片上 11． 用新的盖玻片盖上 12． 轻压盖玻片5分钟，确保胞核基质混合液铺展 13． 放进4℃冰箱里冷却10分钟，直至胶体凝结，避免光照 14． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片 15． 即刻移取xx微升在45℃恒温水槽里的基质液（Reagent C）到载玻片上胞核基质混合液上面 16． 用新的盖玻片盖上 17． 轻压盖玻片5分钟，确保基质液铺展 18． 放进4℃冰箱里冷却10分钟，直至胶体凝结，避免光照 19． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片 20． 将载玻片放进9cm培养皿 21． 加入xx毫升预冷的裂解液（Reagent D） 22． 放进4℃冰箱里孵育60分钟 23． 抽去裂解液 注意事项 1． 本产品为20次操作 2． 操作时须戴手套 3． 整个操作，建议在暗光下进行 4． 建议使用新鲜植物组织 5． 可以使用8毫摩尔甲磺酸乙脂（ethyl methanesulfonate；EMS）预处理样品作为阳性对照，建议使用植物种子甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒－GMS16006 6． 操作时小心轻柔，避免胶体脱位 7． 电泳温度过高，会造成胶体脱位 8． 电泳液（Reagent E）： 10倍浓度为3摩尔NaOH，10毫摩尔EDTA，pH 13.5 9． 中和液（Reagent F）： 400毫摩尔 Tris，pH 7.5 10． 电泳时，电压25伏为佳，建议控制电泳液量或更换电泳液达到要求 11． 植物组织DNA损伤彗星图像如下 12． 本公司提供系列DNA损伤检测分析试剂产品 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
