主要用途 植物组织DNA损伤彗星(Comet)全荧光检测试剂是一种旨在采用分离的细胞核碱性凝胶电泳,在电场环境下,损伤变性的DNA片段迁移形成特定的形态,即DNA移动尾巴,来进行体外评价和半定量分析DNA损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜植物组织包括叶片(leaf)、谷粒(grain)、种子(seed)和根尖(root tip)等DNA损伤研究,包括DNA链断裂、氧化性碱基损伤、DNA剪切损伤、DNA交联、DNA修复等,应用于环境和药物毒理学原位监测、原位突变(mutagenesis in situ)分析、氧化应急反应等研究。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,操作简便,重复一致。
保存方式 保存在4℃冰箱里;胶体液(Reagent A)和基质液(Reagent B)室温下保存;染色液(Reagent G)避免光照;电泳液(Reagent E)具有腐蚀性,注意操作安全;有效证6月 用户自备 无离子水:用于稀释电泳缓冲液 磨砂载玻片和盖玻片:用于放置样品进行微凝胶电泳的器材 恒温培养箱:用于孵育反应 电泳槽:用于微凝胶电泳的装置 1.5毫升离心管:用于混匀基质液的容器 90 mm培养皿:用于样品处理、染色等的容器 荧光显微镜:用于观察细胞核彗星现象 实验步骤 一、 琼脂载玻片准备 1. 准备1张全磨砂载玻片,磨砂面朝上 2. 将胶体液(Reagent A)置于微波炉里加热溶化(注意:避免溢出;参见注意事项4) 3. 放进45℃恒温水槽孵育5分钟 4. 移出xx微升胶体液(Reagent A)到载玻片中间 5. 盖上洁净的盖玻片 6. 轻压盖玻片5分钟,确保胶体液铺展 7. 放进4℃冰箱里备用 二、 样品准备 实验开始,将基质液(Reagent C)置于微波炉里加热溶化(注意:参见注意事项4),然后放进45℃恒温水槽备用。然后进行下列操作。 1. 准备1片新鲜的待测叶片 2. 铺平放进60mm细胞培养皿,置于冰槽里(注意:避免直线光照) 3. 加入xx微升预冷的缓冲液(Reagent B) 4. 使用新的洁净的手术刀,轻柔地切割叶片成细丝状或根尖成细块状(注意:避免切成浆液状或粉碎状) 5. 倾斜和平放培养板三次,确保叶片和缓冲液充分混合 6. 移出50微升细胞核分离液(无渣叶片液)到1.5毫升离心管 7. 加入xx微升在45℃恒温水槽里的基质液(Reagent C) 8. 用枪头上下抽吸混匀 9. 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片 10. 即刻移取75微升胞核基质混合液到载玻片上 11. 用新的盖玻片盖上 12. 轻压盖玻片5分钟,确保胞核基质混合液铺展 13. 放进4℃冰箱里冷却10分钟,直至胶体凝结,避免光照 14. 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片 15. 即刻移取xx微升在45℃恒温水槽里的基质液(Reagent C)到载玻片上胞核基质混合液上面 16. 用新的盖玻片盖上 17. 轻压盖玻片5分钟,确保基质液铺展 18. 放进4℃冰箱里冷却10分钟,直至胶体凝结,避免光照 19. 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片 20. 将载玻片放进9cm培养皿 21. 加入xx毫升预冷的裂解液(Reagent D) 22. 放进4℃冰箱里孵育60分钟 23. 抽去裂解液 三、 凝胶电泳 1. 移出xx毫升电泳液(Reagent E)到250毫升三角烧瓶里 2. 加入225毫升用户自备的无离子水,充分混匀后,标记为电泳工作液 3. 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片 4. 将载玻片置于(具有温度控制的)水平电泳槽里 5. 加入适量的电泳工作液到电泳槽里,恰好在载玻片之上 6. 室温下孵育20分钟 7. 插上电源,设定电压为25伏 8. 在4℃环境下,电泳20分钟 9. 断开电源,取出载玻片 10. 放进9cm培养皿 11. 加入xx毫升中和液(Reagent F) 12. 倒去中和液 13. 重复实验步骤11至12二次 14. 空气中晾干注意事项 1. 本产品为20次操作 2. 操作时须戴手套 3. 整个操作,建议在暗光下进行 4. 胶体液(Reagent A)和基质液(Reagent B)微波炉加热融化时,松开瓶盖,低功率,且密切观察,防止过度加热,导致溢出或干枯 5. 建议使用新鲜植物组织 6. 可以使用8毫摩尔/升甲磺酸乙脂(ethyl methanesulfonate;EMS)预处理样品作为阳性对照,建议使用植物种子甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒-GMS16006 7. 操作时小心轻柔,避免胶体脱位 8. 电泳温度过高,会造成胶体脱位 9. 电泳液(Reagent E)具有腐蚀性,注意操作安全 10. 电泳时,电压25伏为佳,建议控制电泳液量或更换电泳液达到要求 11. 植物组织DNA损伤彗星图像如下 12. 本公司提供系列DNA损伤检测分析试剂产品 质量标准 1. 本产品经鉴定性能稳定 原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司 |